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AUTOR

a.G. buret

C.D. Fischer

G.p. muench

m.J. Lucas

S.c. duquette

La tulatromicina promueve la apoptosis de los leucocitos e inhibe la producción de cXcL8 proinflamatoria y el leucotrieno B4 en modelos de inflamación en el pulmón porcino con A.pleuropneumoniae y Zimosan.

tulatromicina-abstractaLa inducción de la apoptosis de las células polimorfonucleares (PMN), su eliminación por los macrófagos (Mф; efferocytosis), y la reducción en la producción de mediadores proinflamatorios, tales como la interleucina 8 (CXCL8) y el leucotrieno B4 (LTB4), son los aconteciminetos críticos que median en la resolución de la inflamación después de una infección.

El deterioro de estos procesos en algunas enfermedades puede tener efectos nocivos para el tejido del hospedador.

La pleuroneumonía porcina, causada por Actinobacillus pleuropneumoniae (APP),  se caracteriza por una inflamación pulmonar excesiva y daños graves en los tejidos. Las áreas lesionadas de los pulmones infectados con APP contienen altas cantidades de neutrófilos activos o necróticos (PMN).

La eficacia clínica superior de algunos antibióticos utilizados en el tratamiento de enfermedades inflamatorias infecciosas, se ha asociado con efectos inmunomoduladores inherentes
a los mismos.

Recientemente se ha demostrado en un modelo bovino de inflamación pulmonar1 que la tulatromicina tiene efectos antiinflamatorios.

El objetivo de este estudio es caracterizar las posibles acciones inmunomoduladoras de la tulatromicina (TUL) en un modelo porcino de inflamación pulmonar.

Material y métodos

Se llevaron paralelamente pruebas in vitro e in vivo.

  • In vitro se trató con TUL (0,02 a 2,0 mg/ml) PMN recién aislados así como Mф derivados de los monocitos, durante 0,5-2 horas, con presencia o ausencia de APP.
  • In vivo, lechones sanos fueron tratados con TUL (2,5 mg/kg) o bien con una sustancia inocua y se inocularon con APP (1,5 x 107 UFC) o placebo.
  • In vivoAdemás otro grupo de lechones fue desafiado con una sustancia inflamatoria no bacteriana, zimosan (1 mg/kg), para observar in vivo las propiedades antiinflamatorias directas de la TUL en ausencia de bacterias.

RECOGIDA DE MUESTRAS

Se llevó a cabo la recogida de muestras mediante lavado broncoalveolar a las 3 y 24 horas post-infección bajo sedación y anestesia general, como se había descrito con anterioridad2.

Se realizaron necropsias para análisis macroscópico y muestreo histológico después de cada momento indicado.

Para todas las pruebas in vitro, n≥3/grupo; para los estudios in vivo, n≥6/grupo. Se analizaron los datos mediante las pertinentes pruebas de ANOVA o T-test.

RESULTADOS

In vivo, la carga bacteriana de APP y la afluencia de neutrófilos pulmonares resultó ser elevada en pulmones infectados por APP respecto a los controles (p<0,01).

El tratamiento con TUL no alteró el reclutamiento de PMN en los pulmones. Tanto in vivo como in vitro, se comprobó cómo la TUL induce la apoptosis de PMN y Mф, y no la necrosis de los mismos, de forma, tiempo y concentración dependiente.

tulatromicina-redondaEsto se determinó mediante ELISA (p<0,05), tinción fluorescente con la técnica de TUNEL (p<0,05) y Western blotting para la expresión de caspasa-3 activa (p<0,05).

Además, el tratamiento con TUL mejoró la efferocytosis de PMN y la fagocitosis por Mф en relación con el control (p<0,05).

En los pulmones desafiados con APP, las concentraciones de CXCL8 proinflamatorios fueron inferiores en el grupo tratado con TUL (p<0,05).

El LTB4, un potente quimioatrayente  de neutrófilos, fue elevado en los pulmones desafiados con APP y zimosan; en ambos casos, el tratamiento con TUL se asoció con una reducción significativa en el LTB4 (p<0,05).

Además, la TUL atenuó significativamente la patología de la enfermedad en los pulmones porcinos infectados por APP examinados macroscópica e histológicamente.

CONCLUSIONES

La infiltración excesiva y la activación de los PMN en respuesta a un patógeno respiratorio, como el APP, pueden dar lugar a daños graves en los tejidos.

En consecuencia, los tratamientos que se dirigen tanto al agente infeccioso como a la respuesta inmunitaria del huésped, son los más beneficiosos para el tratamiento de las enfermedades inflamatorias inducidas por bacterias, incluyendo la neumonía en cerdos.

Los resultados de este estudio demuestran que la TUL tiene efectos inmunomoduladores en PMN porcinos y Mф in vitro y en los pulmones de los lechones desafiados con APP y zimosan.

De hecho, la TUL promueve la apoptosis de PMN, la eliminación por Mф de células apoptóticas, y disminuye la producción de mediadores proinflamatorios.

Colectivamente, estos datos sugieren que la TUL, además de sus propiedades antimicrobianas, tiene efectos inmunomoduladores innatos que
proporcionan beneficios antiinflamatorios en los cerdos.

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